學術(shù)天地
學會簡介

  廣東省畜牧獸醫(yī)學會是由廣東省民政廳批準成立的具有法人資格的全省性社會團體,是廣東省科學技術(shù)協(xié)會的組成部分,是黨和政府聯(lián)系畜牧獸醫(yī)科技工作者的橋梁和紐帶,是發(fā)展我省畜牧獸醫(yī)事業(yè)的重要社會力量?,F(xiàn)任理事長是廖明同志。

 
張強:CHO表達系統(tǒng)提供優(yōu)質(zhì)重組蛋白支撐科研與醫(yī)療發(fā)展
現(xiàn)代生命科學研究,甚至疾病治療以及檢測與防控中,重組蛋白均扮演著至關(guān)重要的角色,而重組蛋白表達質(zhì)量的高低往往又影響著它作用的發(fā)揮。目前主要發(fā)展出了4類表達系統(tǒng),包括細菌表達系統(tǒng),酵母表達系統(tǒng),昆蟲表達系統(tǒng)以及哺乳動物細胞表達系統(tǒng),其中,哺乳動物細胞表達系統(tǒng)因其翻譯后修飾使得蛋白更接近天然結(jié)構(gòu)而應(yīng)用廣泛。在第33屆廣東畜牧獸醫(yī)科技大會豬病論壇上,來自浙江海隆生物科技有限公司張強博士做了題為《CHO細胞系表達系統(tǒng)介紹及應(yīng)用》專題報告。


△浙江海隆生物科技股份有限公司張強博士


當前對于重組蛋白的應(yīng)用主要是藥物和病毒兩方面,藥用蛋白包括抗體、凝血因子、激素、生長因子等真核細胞產(chǎn)物,而病毒的繁殖、修飾、加工、包裝、出芽等在真核細胞中進行,他們的生成過程都需要真核細胞的加工修飾,而哺乳動物細胞表達蛋白,不僅可溶且具有接近真實的加工和修飾作用,成為這類蛋白生產(chǎn)的最好工具。常用于重組蛋白表達的哺乳動物細胞包括中國倉鼠卵細胞(CHO)、小鼠腎細胞(BHK)、人胚胎腎細胞(HEK293)、人胚胎視網(wǎng)膜細胞(PER.C6)、小鼠胸腺瘤細胞(NS0)和小鼠骨髓瘤細胞(SP2/0),其中CHO和HEK293已經(jīng)開發(fā)出了不同的亞細胞系。CHO細胞表達系統(tǒng)因具有完整的哺乳動物細胞糖基化修飾,缺少分泌內(nèi)源蛋白,易懸浮培養(yǎng),安全性高,對病毒不敏感的優(yōu)勢,最常用于大規(guī)模生產(chǎn)。

CHO細胞系表達系統(tǒng)以增加產(chǎn)量,降低成本為目的進行開發(fā)。通過對載體進行改造,如載體表達框架的優(yōu)化,包括啟動子,內(nèi)含子,順勢調(diào)控原件,miRNA,篩選標記基因等,克隆位點效應(yīng),定點整合等。選擇不同轉(zhuǎn)染方式,如電轉(zhuǎn)、化轉(zhuǎn)以及病毒轉(zhuǎn)染都各有優(yōu)勢。CHO細胞系本身進行改造,如基因突變,已構(gòu)建了基因突變細胞系CHO-DXB11,CHO-DHFR-/-),定點缺失,靶向敲除DHFR、GS基因,促凋亡蛋白BAK、BAX,以提高外源基因的擴增。此外優(yōu)化培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,商業(yè)化培養(yǎng)基、個性化培養(yǎng)基以及保護劑和氨基酸等補料等,pH值、溫度、轉(zhuǎn)速等均影響著細胞生長狀態(tài),進而影響蛋白的表達質(zhì)量。

張強博士表示,全球目前已上市的基于哺乳動物細胞生產(chǎn)的生物制品超過100多種,其中80%是基于CHO細胞表達系統(tǒng),如呼吸道合胞體病毒亞單位疫苗的開發(fā),重組豬瘟E2蛋白亞單位疫苗和流行性腹瀉亞單位疫苗的研發(fā)等。CHO細胞表達系統(tǒng)因其固有優(yōu)勢,和未來對于表達系統(tǒng)更適合的優(yōu)化,會表達出更優(yōu)質(zhì)的重組蛋白,為科研以及醫(yī)療提供更穩(wěn)定的支撐。